如何选择液相色谱保护柱
如何选择液相色谱柱
来自于色谱系统的污染主要指,HPLC仪器系统中部件磨损而产生的固体颗粒,以及流动相系统过滤不*残留的固体颗粒。来自于样品的污染主要指未*溶解的样品或者已*溶解的样品进入色谱系统中,由于样品溶剂和流动相溶剂对样品溶解存在的溶解度差异,导致沉淀析出污染系统。
特别是对于中药 、天然产物、合成中间体及生物药品的检测,因基质的复杂性,色谱柱受污染的情况会加严重。污染会导致色谱系统压力升高、色谱柱塌陷、填料变色等,从而带来检测成本高,测试结果不准确等各种影响。
以下几种情况见意使用保护柱:
1、中药、天然产物及合成中间体等基质较复杂的样品分析--因溶解性差异导致样品析出而污染分析柱的情况比较严重,梯度洗脱时影响大。
2、生物样品分析--因样品的不可逆吸附导致的污染,保护柱可先于分析柱承受这种污染,从而延长分析柱寿命。
保护柱很重要,但选择合适的保护柱重要,选择或使用不当也可能带来截然相反的效果。
保护柱分类及选择
从材质上分:不锈钢材质和PEEK(聚醚醚酮)材质,PEEK材质优缺点--样品对金属离子比较敏感时,选择PEEK材质比较合适,比如某些蛋白分板会用到PEEK材质的分析柱,主要就是考虑到这方面的因素;不锈钢材质优缺点--大部分小分子化合物的分析,选择不锈钢材质保护柱居多,特别是当流动相体系使用到四氢呋喃(THF)或DMSO等一些溶解性较强的溶剂时,必须选择不锈钢材质,甚至对于HPLC系统的管路也需要替换成不锈钢材质,因THF对于PEEK管路有相当强的腐蚀作用。
从结构上分:卡套式(柱芯+柱套)和直接填装短柱
直接填装短柱公优缺点--这种结构的保护柱实质就是短柱优缺点--这种的保护柱实质就是短的色谱柱,一般填装的填料跟分析柱填料*一样,生物样品分析中,用这种类型保护柱居多,除可过滤一些不溶颗粒外,还可除去一些在分析柱上易吸附的杂质。缺点是,一次性使用,污染严重时,只能报废。
卡套式保护柱优缺点--卡套式保护柱的柱套可反复使用,柱芯污染后可替换,厂家会提倡配套瓣保护柱芯,但购买时需要注意,柱芯中有与分析柱匹配的填料,需要确认柱芯中的填料类型再购买。同时,柱芯与柱套需是来源一同一厂家的同一规格否则,会存在匹配上的差异,导致峰型异常或者漏液。
从连接方式上分:独立式和直连式
独立式保护柱优缺点
保护柱和分析柱这间用一段管路连接,不用担心与分析柱在连接上的匹配问题。但使用管路连接时,连接不当容易产生死体积。
直连式保护柱优缺点--保护柱接口带螺纹,可直接与分析柱连接,死体积小,UPLC分析时建议选择直连式保护柱子缺点:购买时需保证接口与分析柱匹配。
保护柱选择考虑以下几方面因素:
1:除非特殊情况,一般选择填料基质与分析柱基质*相同的保护柱。
2、选择保护柱尺寸可按柱体积计算,保护柱体积按分析柱体积的5%-10%即可;如4.6*250mm的分析柱体积约为4ml,保护柱体积可选择在0.2-0.4ml之间为宜。同时,保护柱内径应与分析柱内径相同或相当。
保护住使用注意事项:
1、独立式保护柱与分析柱连接时,连接管路尽可能短,且接口切面平常,尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。
2、卡套式保护柱一般未标注液流方向,使用时自行标注,并按照标注方向来使用,以免正反向使用后,截留的杂质污染分析柱。
3、直接填装的短柱型保护柱,出现柱压升高或峰型变差时,可不接分析柱进行反向清洗,清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
4、卡套式保护柱,柱芯替换时,注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配,同时不易旋拧过紧,以防滑丝。
5、保护柱或柱芯一般不建议超声清洗,因可能对填料表面修饰有影响。
6、如同一保护柱配不同的分析柱使用,每次使用前,保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后,再接分析柱使用。
保护柱与柱前过滤器的区别和使用:
使用保护柱的目的在于延长分析柱的使用寿命,当分析柱造价昂贵时,保护柱的价值尤其能体现,某些情况下,当使用的分析柱本身价格便宜,保护柱并非必选,推荐使用柱前过滤器合适。
柱前过滤器与保护柱两者外形相似,差异主要在于:保护柱内芯装有填料,而柱前过滤器内芯是可换的滤片(一般为带也的不锈钢烧结板)
因此,从结构可以推测使用上的差异:柱前过滤器--通用性强,任何分析柱前都有可使用,因其滤芯只起到过滤和截留杂质的作用。滤片污染后可超声清洗,反复使用。
保护柱--柱中填料除了截留杂质的作用外,也可除去样品中易吸附的杂质,这一点对生物样品分析尤其重要。
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